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https://opaj.napstic.cn/periodicalArticle/downloadReview/0120160600170158
A型肉毒毒素轻链多步纯化及其金属蛋白酶活性研究OA北大核心CSCDCSTPCD
Multi-step purifications of botulinum neurotoxin A light chain and identification of its metalloproteases activity
目的：利用基因工程方法原核表达N－His标签的A型肉毒毒素轻链（ BoNT－ALC）蛋白，多步纯化获得高纯度蛋白，并对其金属蛋白酶活性进行鉴定。方法以A型肉毒毒素为模板，构建重组表达载体pET22b－ALC，转化BL21（DE3），诱导蛋白表达，采用镍柱亲和纯化、阴离子交换以及分子筛纯化获取高纯度目的蛋白；通过体外切割特异性底物SNAP－25实验进行酶活性研究。结果与结论获得高纯度的BoNT－ALC蛋白，对金属蛋白酶活性进行了验证。该纯化方法获得的蛋白纯度高、均一性好，且具有很好的酶活性，为后续研究奠定了基础。
Objective To obtain highly purified botulinum neurotoxin A light chain(BoNT-ALC) protein in E.coli by genetic engineering and multi-step purifications, and identify its metalloproteases activity.Methods The full-length of BoNT-ALC was cloned from BoNT A by PCR and inserted into plasmid pET-22b.Then pET-22b-ALC was transformed into E.coli BL21( DE3) strains and induced by IPTG.The protein was purified by Ni-NTA sepharose,anion exchange column and gel filtration.The enzymatic activity of the protein was identified by SNAP-25.Results and Conclusion A highly purified and homogeneous protein is obtained, which shows good enzymatic activity.
卢晓雪;赵缓;黄彦杰;李涛;王慧
广西医科大学，南宁 530021 军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071
医药卫生
A型肉毒毒素蛋白纯化金属蛋白酶类
botulinum neurotoxin Aprotein purificationmetalloproteases
《军事医学》 2016 (4)
基于核壳量子点-金纳米颗粒FRET探针的高灵敏度食源性肉毒毒素分型检测新技术研究
319-321,3
国家自然科学基金资助项目（31201352）
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