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抗人γ-精浆蛋白VH单域抗体/人p53四价功能域融合基因的构建及空间构象分析OA北大核心CSCD
Construction and space conformation analysis of anti-human γ-seminoprotein VH single domain antibody/human p53 tetramerization domain fusion gene
目的构建抗人γ-精浆蛋白(γ-Sm)重链可变区(VH)单域抗体/人p53四价功能域融合基因,并进行空间构象分析.方法选用人IgG3上游铰链区作为抗体和人p53四价功能域之间连接的linker.利用回归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四价功能域融合基因,并在融合基因5'端和3'端引入SalⅠ与HindⅢ酶切位点,将融合基因克隆入pUC19载体中构建pUC19/IgG3/p53克隆载体.将抗人γ-Sm VH单域抗体克隆入pUC19/IgG3/p53载体中,构建抗人γ-Sm VH单域抗体/人p53四价功能域融合基因.经酶切鉴定及序列测定证实后,利用计算机软件进行空间构象分析.结果获得了抗人γ-Sm VH单域抗体/人 p53四价功能域融合基因,基因全长528bp,可编码176个氨基酸,与已发表的抗人γ-Sm VH单域抗体、人IgG3上游铰链区和人p53四价功能域基因cDNA序列一致.计算机软件分析结果显示,融合基因表达产物可自动装配成四聚体抗体,并具有四条长的、柔性好的多肽,可确保每个抗体空间构象的独立性.结论构建成功四价抗人γ-Sm VH单域抗体,为进一步临床应用奠定基础.
武国军;王智;王栋;袁建林;王禾;郝晓柯
第四军医大学西京医院泌尿外科,第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,第四军医大学西京医院泌尿外科,第四军医大学西京医院泌尿外科,第四军医大学西京医院泌尿外科,第四军医大学唐都医院实验室,
基础医学
人γ-精浆蛋白单域抗体p53四价功能域融合基因
《西安医科大学学报》 2001 (6)
多价抗前列腺癌/抗人CD3双特异单链抗体的构建及表达
505-509,5
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